革蘭氏細菌染色

經(jīng)典革蘭染色法,主要由：結晶紫染色液、碘液、脫色液、石炭酸復紅染液組成。染色結果為：菌體呈紫紅色。
儲存條件：室溫,避光,12個(gè)月

   革蘭氏染色法是丹麥醫生 Christain Gram 于 1884 年所發(fā)明，是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，亦是一種復染法。未經(jīng)染色的細菌，由于其與周?chē)h(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀(guān)察。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀(guān)察到細菌的形態(tài)、排列及某些結構特征，用以分類(lèi)鑒定。通過(guò)此法染色可將細菌鑒別為革蘭陽(yáng)性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類(lèi)。細菌的不同顯色反應是由于細胞壁對乙醇的通透性和抗脫色能力的差異，主要是肽聚糖層厚度和結構決定的。經(jīng)結晶紫染色的細胞用碘液處理后形成不溶性復合物，乙醇能使它脫色。在革蘭陰性細胞染色中，乙醇或丙酮破壞了胞壁外膜、損傷肽聚糖層和細胞質(zhì)膜，結晶紫和碘復合物從細胞中滲漏出來(lái)，當再用其他染色液復染時(shí)，顯現紅色。紅色染料雖然也能進(jìn)入已染成紫色的 G+細胞，但被紫色蓋沒(méi)，所以紅色顯示不出來(lái)。在革蘭陽(yáng)性細胞染色中， 乙醇還能使厚的肽聚糖層脫水，導致孔隙變小， 由于結晶紫和碘復合物分子太大，不能通過(guò)細胞壁，不易脫色，所以保持著(zhù)紫色。

  Enhanced Gramˊs stain 采用最經(jīng)典的革蘭染色配方進(jìn)一步改進(jìn)， 使用增強復染液替代沙黃染色液，增強了染色效率，用于極難染色的細菌。臨床標本直接涂片，背景干凈，胞核胞質(zhì)對比強烈，胞內吞噬體清晰易辨認，細菌染色特征典型。增強革蘭氏染色液

增強革蘭氏染色液操作步驟

1、 涂片：取待檢細菌，于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無(wú)菌水，取菌與的水混合均勻，涂成一薄層。

2、 干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥。                                                            

3、 固定：手持載玻片一端，標本面朝上，在酒精燈的火焰外側快速來(lái)回移動(dòng)3~5次，每次1s，溫度不宜過(guò)高，防止菌體蛋白變性，放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

4、 初染：滴加結晶紫染色液染色 1~2min，清水沖洗去染色液。

5、 媒染：滴加 Gram 碘液，并覆蓋載玻片，室溫放置 1~2min，水洗。  

6、 脫色：滴加脫色液，搖動(dòng) 10～30s，直至流下的脫色液不出現紫色時(shí)為止，立即用水沖去脫色液，終止反應。

7、 復染：滴加沙黃染色液染色 30~60s，水洗。

8、 干燥。鏡檢：置油鏡觀(guān)察。